用于臨床診斷的復合質控品及其制備方法.pdf

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1、(19)中華人民共和國國家知識產權局 (12)發明專利申請 (10)申請公布號 (43)申請公布日 (21)申請號 202011316538.5 (22)申請日 2020.11.23 (71)申請人 南京佰抗生物科技有限公司 地址 210000 江蘇省南京市棲霞區仙林街 道仙林大學城緯地路9號C6幢房屋 903、 905室 (72)發明人 芮兵 (74)專利代理機構 連云港聯創專利代理事務所 (特殊普通合伙) 32330 代理人 劉剛 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/70(2006.01) G01N 33/531(2006.01) G01N 33。

2、/543(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 33/72(2006.01) G01N 33/74(2006.01) (54)發明名稱 一種用于臨床診斷的復合質控品及其制備 方法 (57)摘要 本發明公開了一種基于鐵蛋白納米顆粒載 體連接的多個診斷標志物特異性表位多肽分子 的復合質控品及其制備方法， 通過抗體檢測及表 位分析技術我們可以將絕大多數的診斷標志物 蛋白的優勢表位定位出來， 然后通過連接酯鏈接 到鐵蛋白分子上， 形成 “FerLinkerEpitope Peptide” 復合物， 將合成的該復合物基因序列通 過特定的載體轉入原核大腸桿菌重組表達， 這樣 。

3、含有多個診斷標志物優勢表位多肽分子的復合 抗原 （質控品） 就可以同時被多個診斷試劑檢測 出來。 本發明的質控品檢測效率高， 成本低， 穩定 性極佳， 可在28條件下長期穩定保存。 權利要求書1頁 說明書7頁 序列表8頁 附圖1頁 CN 112094355 A 2020.12.18 CN 112094355 A 1.一種用于臨床診斷的復合質控品， 其特征在于， 包括鐵蛋白和與鐵蛋白通過連接酯 鏈接的若干個診斷標志物特異性表位多肽分子； 所述診斷標志物特異性表位多肽分子為以下任意一種或多種： PCT的診斷標志物特異性表位多肽MKASEL、 IL6的診斷標志物特異性表位多肽QNRFESSEEQ、 。

4、Myo的診斷標志物特異性表位多肽ATKHKIPVK、 CRP的診斷標志物特異性表位多肽APLTKPL、 PGI的診斷標志物特異性表位多肽GSFLYYA、 PGII的診斷標志物特異性表位多肽GTNFVY、 BNP的診斷標志物特異性表位多肽CFGRKMDRI、 或SAA的診斷標志物特異性表位多肽為ANYIGSDKY； 所述的連接酯為谷氨酸-谷氨酸-谷氨酸-絲氨酸。 2.權利要求1所述的用于臨床診斷的復合質控品的制備方法， 其特征在于， 包括以下步 驟： S1、 將診斷標志物蛋白的優勢表位定位出來； S2、 將S1中獲取的診斷標志物蛋白的優勢表位通過連接酯鏈接到鐵蛋白分子上， 形成 復合物序列； S。

5、3、 將該復合物序列合成出來并在體外進行原核大腸桿菌重組表達， 即得含有多個診 斷標志物優勢表位多肽分子的復合抗原。 權利要求書 1/1 頁 2 CN 112094355 A 2 一種用于臨床診斷的復合質控品及其制備方法 技術領域 0001 本發明涉及免疫診斷試劑的質控品技術領域， 具體為一種用于臨床診斷的復合質 控品及其制備方法。 背景技術 0002 在我國， 體外診斷試劑是指： 可單獨使用或與儀器、 器具、 設備或系統組合使用,在 疾病的預防、 診斷、 治療監測、 預后觀察、 健康狀態評價以及遺傳性疾病的預測過程中,用于 對人體樣本(各種體液、 細胞、 組織樣本等)進行體外檢測的試劑、 試。

6、劑盒、 校準品(物)、 質控 品(物)等。 0003 質控品是體外診斷試劑的重要而必不可少的組成部分， 主要用于對體外診斷試劑 進行質量控制。 在實際的臨床應用過程中， 檢驗人員使用體外診斷試劑檢測病人的樣本 （血 清， 尿液等） ， 在此之前， 需要對試劑進行質量驗證以確保檢測結果的準確性。 0004 質控品是指經過一系列嚴格的量值溯源體系， 有確定的靶值及允許的偏差范圍的 一類質量穩定的生物化學制品。 體外診斷試劑在使用之前需要先測試配套的質控品， 若結 果顯示在允許的偏差范圍內則判定試劑質量合格， 可用于檢測病人樣本并報告正確的結 果； 若結果顯示超出了允許的偏差范圍則判定試劑盒質量不合。

7、格， 不可用于檢測病人樣本， 否則會導致錯誤的診斷結果。 0005 在免疫診斷試劑產品中， 質控品通常是用抗原 （靶蛋白） 按照一定的流程配置的， 并對其進行賦值和穩定性的驗證。 傳統的質控品多為單一項目的質控品， 且多使用靶蛋白 分子序列全長作為配置質控品的原料， 這樣的制備方法效率低下， 成本高， 且通常穩定性較 差 （需要制成凍干品以提高穩定性） 。 發明內容 0006 本發明要解決的技術問題是克服現有技術中免疫診斷試劑的質控品為單一項目 的質控品， 制備效率低的缺陷， 提供一種復合質控品。 0007 為了解決上述技術問題， 本發明提供了如下的技術方案： 一種基于鐵蛋白納米顆粒載體連接的。

8、多個診斷標志物特異性表位多肽分子的復合質 控品及其制備方法， 其基本原理如下： 通過抗體檢測及表位分析技術我們可以將絕大多數 的診斷標志物蛋白的優勢表位 （一個表位通常是由57個氨基酸組成的多肽） 定位出來， 然 后通過連接酯 （Linker） 鏈接到鐵蛋白 （Fer） 分子上， 形成 “Fer-Linker-Epitope Peptide” 復合物， 并合成的該復合物基因序列通過特定的載體轉入原核大腸桿菌重組表達， 這樣含 有多個診斷標志物優勢表位多肽分子的復合抗原 （質控品） 就可以同時被多個診斷試劑檢 測出來。 0008 本發明的質控品檢測效率高， 成本低， 穩定性極佳， 可在28條件下。

9、長期穩定保 存。 0009 通常， 這里的Linker是指GGG3 （谷氨酸-谷氨酸-谷氨酸-絲氨酸） ， Peptide是指經 說明書 1/7 頁 3 CN 112094355 A 3 過表位分析鑒定方法測出的一段57個氨基酸多肽， 如PCT （降鈣素原） 蛋白序列如下， 其序 列如SEQ ID NO.13所示： APFRSALESSPADPATLSEDEARLLLAALVQDYVQMKASELEQEQEREGSSLDSPRS-KR-CGNLSTCMLGT YTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP-GKKR-DMSSDLERDHRPHVSMPQNAN 鑒定的優勢表位為： MKASEL。 0。

10、010 該方法制備的復合質控品相比于傳統的單一品種質控品有如下優勢： 一、 產品使用更加高效便捷： 復合質控品含有多個診斷標志物的優勢表位， 可以實現一 個質控品多個項目同時檢測的高效率， 在制備和使用兩個過程中都避免了重復操作。 0011 二、 成本更低： 一方面使用的原料僅為一個片段分子而非蛋白全長， 節約了表達全 長蛋白的成本； 另一方面省去了凍干及重復制備的成本， 極大降低了平均到單個質控品的 制備成本。 0012 三、 穩定性極佳： 由于鐵蛋白分子量大， 結構穩定 （常被用著疫苗的連接載體） ， 整 個復合質控品分子展現了極佳的液體穩定性， 可在28度條件下長期穩定保存。 附圖說明 。

11、0013 附圖用來提供對本發明的進一步理解， 并且構成說明書的一部分， 與本發明的實 施例一起用于解釋本發明， 并不構成對本發明的限制。 在附圖中： 圖1是 “Fer-Linker-Epitope Peptide” 復合物的模型圖。 具體實施方式 0014 以下結合附圖對本發明的優選實施例進行說明， 應當理解， 此處所描述的優選實 施例僅用于說明和解釋本發明， 并不用于限定本發明。 實施例 0015 一種用于臨床診斷的復合質控品， 包括鐵蛋白和與鐵蛋白通過連接酯鏈接的若干 個診斷標志物特異性表位多肽分子。 0016 鐵蛋白是由24個單體自組裝形成的球形聚體， 是分子結構非常穩定納米顆粒蛋 白，。

12、 其中C、 N terminal和loop zone均可以用于插入外源基因片段， 可將外源多肽或蛋白穩 定的展示在球形顆粒的表面， 基于上述原理， 鐵蛋白載體作為納米顆粒疫苗載體， 藥物呈 遞， 活體成像等領域被廣泛關注。 本研究中我們利用分子生物學方法將多診斷標志物的優 勢表位序列在基因層面上串聯到鐵蛋白上， 利用原核大腸桿菌表達系統表達出含有多診斷 標志位優勢表位的鐵蛋白復合質控品。 0017 具體制備方法： 鐵蛋白載體氨基酸序列， 其序列如SEQ ID NO.1所示。 0018 MLSKDIIKLLNEQVNKEMNSSNLYMSMSSWCYTHSLDGAGLFLFDHAAEEYEHAK。

13、KLIIFLNENNVPVQ LTSISAPEHKFEGLTQIFQKAYEHEQHISESINNIVDHAIKSKDHATFNFLQWYVAEQHEEEVLFKDILDKIELIGN ENHGLYLADQYVKGIAKSRKS 多診斷標志物預測的優勢表位如下： PCT： MKASEL， 其序列如SEQ ID NO.2所示； 說明書 2/7 頁 4 CN 112094355 A 4 IL6： QNRFESSEEQ， 其序列如SEQ ID NO.3所示； Myo： ATKHKIPVK， 其序列如SEQ ID NO.4所示。 0019 CRP： APLTKPL， 其序列如SEQ ID NO.5所示。

14、。 0020 PGI： GSFLYYA， 其序列如SEQ ID NO.6所示。 0021 PGII； GTNFVY， 其序列如SEQ ID NO.7所示。 0022 BNP： CFGRKMDRI， 其序列如SEQ ID NO.8所示。 0023 SAA： ANYIGSDKY， 其序列如SEQ ID NO.9所示。 0024 將各診斷標志物優勢表位序列串聯插入到鐵蛋白的序列中， 插入后的序列如SEQ ID NO.10所示： MHHHHHHGSMKASELGGGGSLSKDIIKLLNEQVNKEMNSSNLYMSMSSWCYTHGSQNRFESSEEGSSLDGAGL FLFDHAAEEYEHA。

15、KKLIIFLNENNGSATKHKIPVKGSAPLTKPLGSFLYYAVPVQLGSGTNFVYGSTSISAPEHKFE GLTQIFQKAYEHEQHISESINNIVDHAIKSGSGTNFVYGSCFGRKMDRIGSANYIGSDKYGSKDHATFNFLQWYVAE QHEEEVLFKDILDKIELIGNENHGLYLADQYVKGIAKSRKS 將上述序列用密碼子優化軟件在大腸桿菌表達系統中優化， 優化后序列如SEQ ID NO.11所示： CATATGCACCATCATCATCACCATGGTAGCATGAAAGCAAGCGAATTAGGTGGTGGTGGTAGCCTG。

16、AGCAAAG ATATTATCAAACTGCTGAATGAACAGGTGAACAAAGAAATGAATAGCAGCAACCTGTATATGAGCATGAGCAGCTGG TGTTATACCCATGGTAGTCAGAATCGTTTTGAAAGCAGTGAAGAGGGTAGCAGCCTGGATGGTGCAGGTCTGTTTCT GTTTGATCATGCAGCCGAAGAATATGAGCACGCAAAAAAACTGATCATCTTCCTGAATGAAAATAATGGCAGCGCCA CCAAACATAAAATTCCGGTTAAAGGTAGCGCACCGCTGACCAAACCGCTGGGTAGCTT。

17、TCTGTATTATGCAGTTCCG GTTCAGTTAGGTAGCGGCACCAATTTTGTTTATGGTAGCACCAGCATTAGTGCACCGGAACATAAATTTGAAGGTCT GACCCAGATTTTCCAGAAAGCCTATGAACATGAACAGCATATTAGCGAGAGCATCAACAACATTGTGGATCATGCAA TTAAAAGCGGTTCAGGTACGAACTTTGTGTATGGTTCATGTTTTGGTCGTAAAATGGATCGTATTGGTAGCGCCAAT TATATCGGCAGCGATAAATATGGCAGCAAAGATCATGCCACCTTTA。

18、ACTTTCTGCAGTGGTATGTTGCAGAACAGCA TGAAGAAGAAGTGCTGTTTAAAGACATCCTGGATAAAATTGAACTGATCGGCAATGAAAACCATGGTCTGTATCTGG CAGATCAGTATGTGAAAGGTATTGCCAAAAGCCGCAAAAGCTAACTCGAG 雙下劃線分別為NdeI和XhoI酶切位點； 將上述核苷酸序列送基因合成公司進行基因合成并用NdeI&XhoI酶切位點克隆至pET- 30a(+)表達載體中,完成表達質粒的構建。 0025 將構建好的質粒轉化到BL21 （DE3） 感受態中進行誘導表達； 當菌液OD600nm達到。

19、0.6 時， 加入終濃度為0.1mM的IPTG， 16誘導表達24h， 12000g， 離心5min； 用lysis buffer （50mM NaH2PO4,300mM NaCl， 10mM imidazole, pH8.0） 重懸菌體， 超聲破碎菌體后， 12000g,離心30min， 上清用0.45um濾器過濾； Lysis buffer平衡Ni NTA Beads 6FF后上樣， Wash buffer （50mM NaH2PO4,300mM NaCl， 60mM imidazole, pH8.0） 洗滌20倍柱體積， Elution buffer （50mM NaH2PO4,300m。

20、M NaCl， 250mM imidazole, pH8.0） 洗脫目的蛋白， 將 蛋白透析至PBS緩沖液中保存即得該復合質控品蛋白。 0026 將制備好的8種復合質控品進行靶值測定與穩定性驗證 （全部使用進口品牌且在 國內已注冊、 臨床使用的體外診斷試劑盒驗證） ， 數據如下： 表1實施例獲得的質控品穩定性數據 說明書 3/7 頁 5 CN 112094355 A 5 表1顯示了實施例所得的質控品的穩定性數據， 由表1可見本發明的質控品37高溫放 置30天測試靶值結果無明顯變化， 穩定性極佳， 在冷藏28條件下， 放置380天靶值仍然 在允許的偏差范圍內。 0027 備注： 表1展示了8個診。

21、斷項目的復合質控品， 但本發明包括但不限于這8項的復合 質控品， 本發明的質控項目包含目前臨床上運用的所有免疫診斷試劑盒質控品 （以國家食 品藥品監督管理局網站能夠查詢到的免疫診斷項目為準） 。 0028 質控品均一性驗證 隨機抽取同一生產批次的10瓶質控品， 每包裝單元測試1次， 按下面的公式計算測試結 果的平均值和標準差S1； 另用上述質控品中的1瓶連續測試10次數， 計算測試結果的平均值 和標準差S2； 按下列各公式計算瓶間重復性CV%。 0029公式 1 公式 2 公式 3 公式 4 當S1S2時， 令CV瓶間=0 式中：-平均值； S-標準差； n-測量次數； xi-指定參數第i 次。

22、測量值。 0030 結果如下： 表2 PCT質控品的均一性驗證 說明書 4/7 頁 6 CN 112094355 A 6 表3 IL6質控品的均一性驗證 表4Myo質控品的均一性驗證 表5 BNP質控品的均一性驗證 表6 PGI質控品的均一性驗證 說明書 5/7 頁 7 CN 112094355 A 7 表7 PGII質控品的均一性驗證 表8 SAA質控品的均一性驗證 表9 CRP質控品的均一性驗證 說明書 6/7 頁 8 CN 112094355 A 8 上述數據表明本發明中的復合質控品具有良好的瓶間重復性， 各測試項目重復性CV小 于1%。 0030 最后應說明的是： 以上所述僅為本發明的。

23、優選實施例而已， 并不用于限制本發明， 盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明， 對于本領域的技術人員來說， 其依然可 以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改， 或者對其中部分技術特征進行等同替換。 凡在本發明的精神和原則之內， 所作的任何修改、 等同替換、 改進等， 均應包含在本發明的 保護范圍之內。 說明書 7/7 頁 9 CN 112094355 A 9 序列表 南京佰抗生物科技有限公司 一種用于臨床診斷的復合質控品及其制備方法 2020-11-19 13 SIPOSequenceListing 1.0 1 167 PRT 人工序列(Artificial Sequence) 1 M。

24、et Leu Ser Lys Asp Ile Ile Lys Leu Leu Asn Glu Gln Val Asn Lys 1 5 10 15 Glu Met Asn Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser Met Ser Ser Trp Cys Tyr 20 25 30 Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe Leu Phe Asp His Ala Ala 35 40 45 Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile Ile Phe Leu Asn Glu Asn 50 55 60 Asn Val 。

25、Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser Ala Pro Glu His Lys Phe 65 70 75 80 Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala Tyr Glu His Glu Gln His 85 90 95 Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp His Ala Ile Lys Ser Lys 100 105 110 Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp Tyr Val Ala Glu Gln His 115 120 125 Glu Glu。

26、 Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu Asp Lys Ile Glu Leu Ile 130 135 140 Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala Asp Gln Tyr Val Lys Gly 145 150 155 160 Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser 165 2 6 PRT 人工序列(Artificial Sequence) 2 序列表 1/8 頁 10 CN 112094355 A 10 Met Lys Ala Ser Glu Leu 1 5 3 10 PRT 人工序列(Artificial。

27、 Sequence) 3 Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln 1 5 10 4 9 PRT 人工序列(Artificial Sequence) 4 Ala Thr Lys His Lys Ile Pro Val Lys 1 5 5 7 PRT 人工序列(Artificial Sequence) 5 Ala Pro Leu Thr Lys Pro Leu 1 5 6 7 PRT 人工序列(Artificial Sequence) 6 Gly Ser Phe Leu Tyr Tyr Ala 1 5 7 6 PRT 人工序列(Artificial Sequ。

28、ence) 7 Gly Thr Asn Phe Val Tyr 1 5 8 9 序列表 2/8 頁 11 CN 112094355 A 11 PRT 人工序列(Artificial Sequence) 8 Cys Phe Gly Arg Lys Met Asp Arg Ile 1 5 9 9 PRT 人工序列(Artificial Sequence) 9 Ala Asn Tyr Ile Gly Ser Asp Lys Tyr 1 5 10 268 PRT 人工序列(Artificial Sequence) 10 Met His His His His His His Gly Ser Met L。

29、ys Ala Ser Glu Leu Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Leu Ser Lys Asp Ile Ile Lys Leu Leu Asn Glu Gln 20 25 30 Val Asn Lys Glu Met Asn Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser Met Ser Ser 35 40 45 Trp Cys Tyr Thr His Gly Ser Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu 50 55 60 Gly Ser Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe Leu Phe 。

30、Asp His Ala Ala 65 70 75 80 Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile Ile Phe Leu Asn Glu Asn 85 90 95 Asn Gly Ser Ala Thr Lys His Lys Ile Pro Val Lys Gly Ser Ala Pro 100 105 110 Leu Thr Lys Pro Leu Gly Ser Phe Leu Tyr Tyr Ala Val Pro Val Gln 115 120 125 Leu Gly Ser Gly Thr Asn Phe Val Tyr Gly Ser Thr。

31、 Ser Ile Ser Ala 130 135 140 Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala Tyr 145 150 155 160 Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp His 165 170 175 序列表 3/8 頁 12 CN 112094355 A 12 Ala Ile Lys Ser Gly Ser Gly Thr Asn Phe Val Tyr Gly Ser Cys Phe 180 185 190 Gly Arg 。

32、Lys Met Asp Arg Ile Gly Ser Ala Asn Tyr Ile Gly Ser Asp 195 200 205 Lys Tyr Gly Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp Tyr 210 215 220 Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu Asp 225 230 235 240 Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala Asp 245 250 255 。

33、Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser 260 265 11 816 PRT 人工序列(Artificial Sequence) 11 Cys Ala Thr Ala Thr Gly Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Thr Cys 1 5 10 15 Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Gly Gly Thr Ala Gly Cys Ala Thr 20 25 30 Gly Ala Ala Ala Gly Cys Ala Ala Gly Cys Gly Ala Ala Thr T。

34、hr Ala 35 40 45 Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Ala Gly Cys Cys 50 55 60 Thr Gly Ala Gly Cys Ala Ala Ala Gly Ala Thr Ala Thr Thr Ala Thr 65 70 75 80 Cys Ala Ala Ala Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Thr Gly Ala Ala 85 90 95 Cys Ala Gly Gly Thr Gly Ala Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Ala Al。

35、a 100 105 110 Thr Gly Ala Ala Thr Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Ala Cys Cys Thr 115 120 125 Gly Thr Ala Thr Ala Thr Gly Ala Gly Cys Ala Thr Gly Ala Gly Cys 130 135 140 Ala Gly Cys Thr Gly Gly Thr Gly Thr Thr Ala Thr Ala Cys Cys Cys 145 150 155 160 Ala Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Cys Ala Gly Ala Ala Th。

36、r Cys Gly 165 170 175 序列表 4/8 頁 13 CN 112094355 A 13 Thr Thr Thr Thr Gly Ala Ala Ala Gly Cys Ala Gly Thr Gly Ala Ala 180 185 190 Gly Ala Gly Gly Gly Thr Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly 195 200 205 Ala Thr Gly Gly Thr Gly Cys Ala Gly Gly Thr Cys Thr Gly Thr Thr 210 215 220 Thr Cys Thr Gly Thr。

37、 Thr Thr Gly Ala Thr Cys Ala Thr Gly Cys Ala 225 230 235 240 Gly Cys Cys Gly Ala Ala Gly Ala Ala Thr Ala Thr Gly Ala Gly Cys 245 250 255 Ala Cys Gly Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Cys Thr Gly Ala Thr 260 265 270 Cys Ala Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Gly Ala Ala Thr Gly Ala Ala 275 280 285 Ala Ala Thr。

38、 Ala Ala Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Gly Cys Cys Ala 290 295 300 Cys Cys Ala Ala Ala Cys Ala Thr Ala Ala Ala Ala Thr Thr Cys Cys 305 310 315 320 Gly Gly Thr Thr Ala Ala Ala Gly Gly Thr Ala Gly Cys Gly Cys Ala 325 330 335 Cys Cys Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Ala Ala Ala Cys Cys Gly Cys 340 345 350 Thr。

39、 Gly Gly Gly Thr Ala Gly Cys Thr Thr Thr Cys Thr Gly Thr Ala 355 360 365 Thr Thr Ala Thr Gly Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Gly Gly Thr Thr 370 375 380 Cys Ala Gly Thr Thr Ala Gly Gly Thr Ala Gly Cys Gly Gly Cys Ala 385 390 395 400 Cys Cys Ala Ala Thr Thr Thr Thr Gly Thr Thr Thr Ala Thr Gly Gly 405 410。

40、 415 Thr Ala Gly Cys Ala Cys Cys Ala Gly Cys Ala Thr Thr Ala Gly Thr 420 425 430 Gly Cys Ala Cys Cys Gly Gly Ala Ala Cys Ala Thr Ala Ala Ala Thr 435 440 445 Thr Thr Gly Ala Ala Gly Gly Thr Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys Ala 450 455 460 Gly Ala Thr Thr Thr Thr Cys Cys Ala Gly Ala Ala Ala Gly Cys Cys 465。

41、 470 475 480 Thr Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys 序列表 5/8 頁 14 CN 112094355 A 14 485 490 495 Ala Thr Ala Thr Thr Ala Gly Cys Gly Ala Gly Ala Gly Cys Ala Thr 500 505 510 Cys Ala Ala Cys Ala Ala Cys Ala Thr Thr Gly Thr Gly Gly Ala Thr 515 520 525 Cys Ala Thr Gly Cys Ala Ala 。

42、Thr Thr Ala Ala Ala Ala Gly Cys Gly 530 535 540 Gly Thr Thr Cys Ala Gly Gly Thr Ala Cys Gly Ala Ala Cys Thr Thr 545 550 555 560 Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Gly Gly Thr Thr Cys Ala Thr Gly Thr 565 570 575 Thr Thr Thr Gly Gly Thr Cys Gly Thr Ala Ala Ala Ala Thr Gly Gly 580 585 590 Ala Thr Cys Gly Thr 。

43、Ala Thr Thr Gly Gly Thr Ala Gly Cys Gly Cys 595 600 605 Cys Ala Ala Thr Thr Ala Thr Ala Thr Cys Gly Gly Cys Ala Gly Cys 610 615 620 Gly Ala Thr Ala Ala Ala Thr Ala Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Ala 625 630 635 640 Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys Thr Thr 645 650 655 Thr Ala Ala 。

44、Cys Thr Thr Thr Cys Thr Gly Cys Ala Gly Thr Gly Gly 660 665 670 Thr Ala Thr Gly Thr Thr Gly Cys Ala Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys 675 680 685 Ala Thr Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Thr Gly Cys Thr 690 695 700 Gly Thr Thr Thr Ala Ala Ala Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Thr Gly 705 710 715 720 Gly 。

45、Ala Thr Ala Ala Ala Ala Thr Thr Gly Ala Ala Cys Thr Gly Ala 725 730 735 Thr Cys Gly Gly Cys Ala Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala 740 745 750 Thr Gly Gly Thr Cys Thr Gly Thr Ala Thr Cys Thr Gly Gly Cys Ala 755 760 765 Gly Ala Thr Cys Ala Gly Thr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Ala Ala Gly 770 775 780 。

46、Gly Thr Ala Thr Thr Gly Cys Cys Ala Ala Ala Ala Gly Cys Cys Gly 785 790 795 800 序列表 6/8 頁 15 CN 112094355 A 15 Cys Ala Ala Ala Ala Gly Cys Thr Ala Ala Cys Thr Cys Gly Ala Gly 805 810 815 12 171 PRT 人工序列(Artificial Sequence) 12 Xaa Xaa Xaa Xaa Met Leu Ser Lys Asp Ile Ile Lys Leu Leu Asn Glu 1 5 10 15。

47、 Gln Val Asn Lys Glu Met Asn Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser Met Ser 20 25 30 Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe Leu Phe 35 40 45 Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile Ile Phe 50 55 60 Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser Ala Pro 65 70 75 80 Glu 。

48、His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala Tyr Glu 85 90 95 His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp His Ala 100 105 110 Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp Tyr Val 115 120 125 Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu Asp Lys 130 135 140 Ile。

49、 Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala Asp Gln 145 150 155 160 Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser 165 170 13 116 PRT 人工序列(Artificial Sequence) 13 Ala Pro Phe Arg Ser Ala Leu Glu Ser Ser Pro Ala Asp Pro Ala Thr 1 5 10 15 Leu Ser Glu Asp Glu Ala Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Val G。

50、ln Asp 20 25 30 Tyr Val Gln Met Lys Ala Ser Glu Leu Glu Gln Glu Gln Glu Arg Glu 序列表 7/8 頁 16 CN 112094355 A 16 35 40 45 Gly Ser Ser Leu Asp Ser Pro Arg Ser Lys Arg Cys Gly Asn Leu Ser 50 55 60 Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe Asn Lys Phe His Thr 65 70 75 80 Phe Pro Gln Thr Ala Ile Gly Val。